批号更换:试剂和校准品该如何进行检验性能评价?

2016-09-02 07:25 来源:丁香园 作者:王兴光
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临床检验工作中,我们经常面临一个情况:试剂或者校准品的批号不断更换,这种情况下,应该如何进行性能验证?

美国临床生化实验室标准化委员会(Clinical and Laboratory Standards Institude,CLSI)指南 EP26-A 文件对更换批号后,试剂和校准品的性能评价有指导意见,包括:检测准确性、测定偏差、校准品、可替代性、显著性差异(CD)、测量误差、基质效应、测定程序、检测范围、医学允许误差、检测精密度等内容,但这些意见繁杂,临床执行起来比较困难。

所以基于这种现状,汉密尔顿区域检验医学项目的专家和相关技术人员推广了一种更易被临床接受的方法。该研究由 AndrewC.Don-Wauchope 发表在 Clinical Biochemistry 杂志上,6 个独立实验室的验证发现,该方法是一个有应用价值并且非常实用的方法。

如何对新批号的试剂进行性能验证?

首先,选择批号评价的标本:病人标本和质控品,质控品已经标定参考范围,并且有严格的靶值。由于病人标本能够最好的反应临床,建议选择病人血液标本。在选择病人标本时,按预测选择三个低值水平的标本、三个中等水平的标本、三个高等水平的标本,另外选择一个附加标本,其预期值或者处于最低检出限水平,或者处于检测上限水平,共选择 10 个病人标本。

病人标本在评估实验时,其结果变动范围应该与仪器检测范围保持一致性。当批号改变时,我们对每个水平的质控品进行 3 个复孔的检测。在制定病人标本和质控品的数量和检测次数问题上,与 CLSI 指南 EP26-A 文件意见一致:为了提高对新批号的验证效能,增加标本数量和增加标本的重复检验次数有同样的作用,建议对选定标本进行重复检测,而不是盲目的增加标本数量。

要选择可接受的靶值,该环节非常重要,某个批号的试剂盒是否可以被接受使用,选择可接受的靶值是关键的步骤。CLSI 建议使用斯德哥尔摩标准,允许总误差(TEa)作为一个重要的参考标准使用,一个理想的靶值是 1/3 TEa。并且偏差和线性回归斜率(系数)在 0.9-1.1 之间。

然后,上机检测,上机之前,使用指定的质控品对仪器的稳定性进行检测。在仪器性能稳定的前提下,待开机稳定后,按说明加载新批号的试剂和校准品。这些完成后,选定的病人标本和质控品才可以上机检测。该环节,与 CLSI 指南 EP26-A 文件中内容有差别,依据 EP26-A 文件:分别使用新旧批号的试剂,对病人标本和质控品进行检测,因而得到两组数据,对两组数据进行显著性差异分析(计算 CD 值),CLSI 指南提供的方法会有一些问题:在不影响常规标本检测的前提下,使用新旧批号试剂完成检测比较困难,并且如果按常规样本采集量,可能会难以完成检测。

最后,分析数据,采用 Excel 表格对数据进行分析 。采用新旧批号的试剂盒对病人标本进行检测,计算每个样本值和样本平均值、单个样本的偏差、平均偏差的百分率,并且要求 10 个病人样本均应达到靶值标准,除此之外新旧批号试剂盒之间的线性相关性也要计算。线性回归方程,变异系数要求在 10% 之内,质控结果确保落在制定均值的两个标准差(± 2SD)范围内。

临床讨论

由于实验室之间的方法不同,制定科学完善的批号评价报告确实面临着一定的问题。在 CLSI 指南公布之前,并没有一个权威的指南来统一实验室方法。尽管 CLSI 指南出台,但专家组成员之间仍有不同的意见,两个主要的议题:标本的类型和数量、可接受的标准。

一部分人认为质控品的使用是合适的,而使用病人标本是没有必要的并且增加了工作量。另外一部分人,认为选择的病人标本数量过多或者过少。本文所述方法,可以针对实验结果给予良好的信息,不仅能够检测一致偏差,而且可以检测比例偏差。不仅能够提供给试剂供应商重要的信息:批号变动给实验带来的影响,而且可以证明通过熟练的检测手段可以分析新批号的试剂是否达到标准。

研究者对 CLSI 中病人标本数量的计算方法进行回顾,并参照 CLSI 指南制定一些试验方法相关的细节性问题,当然这一过程需要大量的时间,并且对于实验样本的认定,对于实验室技术人员是更大的挑战。

对于可接受的标准问题同样有不同的意见。之前的指南包括:偏差分析、斜率分析、质控材料结果的分析等等。围绕试剂和校准品分析不精确性、生物学变异的影响的讨论仍在继续。针对部分检测方法,以三分之一的允许总误差(TEa)作为标准对检验结果进行分析获得生物变异性靶值是一个实用性强的方法。

必须强调一点,试剂生产商针对试剂和校准品批号变动这一问题,应该拓宽可接受的范围。如果实验显示未达到三分之一的允许总误差,应该应用其他的靶值或者进行故障排除。

针对试剂批号更换后进行性能评价意义重大

依据 CLSI 指南 EP26-A 文件,尽管新批号的试剂在出厂前,已经通过生产质检部门的验收标准,但是一些因素会导致试剂和校准品结果的变化:如新旧试剂成分有变化、试剂成分的不稳定性、运输和储存过程的变异、新批号试剂不恰当的校准等等。 

如何对新批号的试剂和校准品进行评价?专业性的操作差别较大。然而非常重要的一点是,我们采取实验措施以及做出专业性的判断之前,要有充足的数据解释。对于这方面,CLSI 可以给我们提供信息资源。本文所述方法在 CLSI 指南基础上做了相应的改进,是一个有意义、实用的方法。

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编辑: 张开平

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